Выделение вируса. Несмотря на то, что обычные методы выделения вируса малоэффективны при постановке диагноза БМ, они ценны при исследовании эпизоотологических и других характеристик вируса. Для титрования ВБМ и связанных с ним вакцинных вирусов применяются родственные методы. Вирус болезни Марека можно выделить спустя всего лишь один или два дня после инокуляции, либо через 5 дней после контактного воздействия и в течение всей жизни кур. Предпочтительна инокуляция неповрежденных жизнеспособных клеток, так как в большинстве случаев инфекционность связана с клетками. В то же время вирус могут содержать бесклеточные препараты кожи, перхоти или кончиков перьев инфицированных кур.

Вирус болезни Марека был выделен с помощью прямого культивирования почечных клеток от инфицированных кур. Для доказательства наличия вируса особенно полезно применение экспресс-метода с использованием лимфоцитных культур после реакции флюоресцирующих антител. Этот метод может также применяться для выделения вируса в том случае, если выращенные антиген-положительные культуры лимфоцитов переносятся на чувствительные однослойные культуры.

Дифференциальная диагностика. Несмотря на имеющиеся методические указания, клиническая диагностика БМ на практике сталкивается с определенными трудностями. Это, вероятно, связано с тем, что патогномоничное макроскопическое поражение отсутствует, а поражения, наблюдаемые при БМ, могут быть сильно похожи на поражения при лимфоидном лейкозе (ЛЛ), распространенного до сих пор, или на поражения при ретикулоэндотелиозе (РЭ), который в последнее время широко распространился в странах Среднего Востока. Вирус ретикулоэндотелиоза (ВРЭ) широко распространен в США и может вызывать экспериментальные поражения (гипертрофия нервов и лимфомы). Они похожи на поражения БМ даже в большей степени, чем поражения, вызванные вирусом лейкоза птиц (ВЛП).

МАКРОСКОПИЧЕСКАЯ ПАТОЛОГИЯ. Несмотря на то что увеличенные периферические нервы и висцеральные лимфомы обычны при развитии БМ, ни одно из поражений не проявляется в обязательном порядке и не является патогномоничным. Таким образом, при посмертной постановке диагноза БМ надо рассматривать другие критерии, например, возраст и распространение поражений. Гистологически куры положительно диагностировались на БМ на основании макроскопической патологии и возраста в том случае, если встретилось по крайней мере одно из следующих состояний: 1) лейкозная гипертрофия периферических нервов;

2) лимфоидные опухоли в различных тканях (печени, сердца, гонаде, коже, мышцах, железистом желудке) у птиц, возраст которых менее 16 недель;

3) висцеральные лимфоидные опухоли у птиц в возрасте 16 недель и старше, у которых не было неопластических образований в фабрициевой сумке;

4) обесцвечивание радужной оболочки и нарушение формы зрачка, подобные показанным на фото.

Определяющими для постановки диагноза предположениями являются отсутствие опухолей фабрициевой сумки в случаях БМ у птиц старше 16 недель, устойчивое присутствие больших опухолей фабрициевой сумки в случаях лимфоидного лейкоза или других не связанных опухолей только у птиц старше 16 недель. Еще одно предположение заключается в том, что если в патологический процесс не вовлечена фабрициевая сумка, инфицирование ВРЭ только в редких случаях вызывает у разводимых коммерческим способом кур увеличение нервов или лимфомы. Несмотря на то, что эти допущения не могут быть неизменно верными, диагностические ошибки и будут нечасты, если аутопсия выполняется очень внимательно и проводится обследование сразу нескольких птиц. Обследование фабрициевой сумки особенно важно и требует разрезания органа с внимательным осмотром поверхности эпителиальной ткани. Однако, если диагноз базируется только на макроскопической патологии, он не может рассматриваться в качестве окончательного.

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ОТ ДРУГИХ БОЛЕЗНЕЙ. Лимфоидный лейкоз — еще одно заболевание, которое нужно иметь в виду при проведении дифференциальной диагностики болезни Марека. Однако лимфоидный лейкоз можно в обычных случаях отличить от болезни Марека по характерному для ЛЛ вовлечению в паталогический процесс фабрициевой сумки, присутствием маркёров В-клеток, наличием геномов или антигенов вируса лейкоза птиц.

Другими болезнями, макроскопические поражения или паралитические признаки которых можно спутать с БМ, являются миелобластоз, эритробластоз, карцинома яичников, другие неоплазмы, недостаточность рибофлавина, туберкулез, гистоманоз, генетический серый глаз, ньюкастлская болезнь, энцефаломиелит птиц, а также совместные инфекции или повреждения.

ЛЕЧЕНИЕ. В настоящее время не существует эффективного лечения БМ в стаях или у отдельных кур. Однако у некоторых птиц, имеющих клинические признаки БМ, при определенных обстоятельствах наблюдается регресс поражений, и они выздоравливают.

ПРОФИЛАКТИКА И КОНТРОЛЬ. Разработка хороших вакцин для борьбы с болезнью Марека — значительное достижение в сельском хозяйстве (т. к. до начала применения вакцин БМ была самым «дорогим» заболеванием домашних птиц) и одновременно основа в исследованиях рака (потому что это неопластическое заболевание стало первым, попытки контроля которого были сделаны у всех видов птиц). Вакцинация есть и будет центральной стратегией профилактики и контроля БМ. Однако важными дополнениями к вакцинации являются генетическая устойчивость и биологическая безопасность. ВАКЦИНАЦИЯ. Защитить кур от БМ способны вакцины на основе трех вирусных серотипов, смесях серотипов и рекомбинантные вакцины. Моновалентные вакцины созданы на основе аттенуированного вируса БМ серотипа 1 и ВГИ. Для получения эффекта синергии, которая описана для вирусов серотипов 2 и 3, обычно комбинируют натуральные вирулентные изоляты серотипа 2 с ВГИ. Помимо этого, используется много других комбинаций. Были разработаны экспериментальные вакцины, основанные на технологии рекомбинантных ДНК, но они еще не лицензированы для использования. Несмотря на то, что защитными являются все виды вакцин, чаще применяются вакцины на основе ВГИ. Это связано с их большей экономичностью с точки зрения производства, а также с тем, что выделенный из инфицированных клеток клеточно-свободный вирус может быть подвергнут лиофилизации для удобства хранения и работы с ним. Кроме того, широкое применение нашла клеточно-ассоциированная форма ВГИ, хранимая в жидком азоте. Обширность применения такой вакцины, вероятно, определяется более высокой по сравнению с вакциной на основе клеточно-свободного вируса эффективностью в присутствии полученных от матери антител. В настоящее время в распоряжении имеются клеточно-ассоциированные вакцины серотипов 1 и 2.

ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВАКЦИН.

Обычно вакцины применяются при выведении цыплят. Клеточно-ассоциированные и клеточно-свободные вакцины применяются посредством парентеральной инокуляции.

Обычно доза превышает 1000 бляшкообразующих единиц (БОЕ) на цыпленка. Внутримышечный маршрут введения может оказаться немного эффективнее, однако ни одним из исследователей это преимущество не наблюдалось.

Установлено, что вакцинация 18-дневных эмбрионов сокращает сроки развития защитного иммунитета на несколько дней. Исследователи предложили использовать такую методику для борьбы с негативными последствиями раннего воздействия вирулентного ВБМ. Эта процедура была автоматизирована и в настоящее время используется для вакцинации более 50% выращиваемых на коммерческой основе бройлеров в США. Вакцинация эмбрионов позволила уменьшить трудовые затраты и обеспечить точное введение вакцин. Тем не менее в полевых условиях в противоположность лабораторным данным методика не привела к значительному сокращению потерь от болезни Марека.

Надо отметить, что при вакцинации степень защиты тем хуже, чем короче интервал между вакцинацией и воздействием вирулентного полевого вируса. Одной из серьезных причин появления большого количества случаев БМ в вакцинированных стаях является раннее воздействие с помощью вируса, так как для установления прочного иммунитета требуется до 7 дней, а воздействия ВБМ в полевых условиях обычно сказывается вскоре после размещения цыплят. Значительные потери от болезни Марека связаны с наличием среди несушек особей самых разных возрастов, что не дает возможности предотвратить раннее воздействие вируса.

Важным фактором в формировании вакцинного иммунитета против БМ является также порода кур. Установлено, что вакцина на основе ВГИ у генетически резистентных кур обеспечивает лучший иммунитет, чем бивалентная вакцина (ВГИ + SB1) у восприимчивых кур. Для повышения эффективности вакцинации делались попытки увеличения дозы вакцин или проведение двойной вакцинации, которые имели небольшой успех или вообще не имели такового. Тем не менее, реагируя на возрастающий спрос, производители вакцин продолжали увеличивать рекомендованные дозы. Это привело к тому, что в настоящее время куры-несушки и племенные птицы получают при выведении цыплят до 10 000 БОЕ ВГИ. В Европе стала популярной двойная вакцинация. Она используется иногда и в Соединенных Штатах. Тем не менее убедительные доказательства эффективности такого подхода отсутствуют.

Полагают, что поддержанию вакцинного иммунитета мешает стресс. Важным является правильное обращение с вакциной во время оттаивания и восстановления.

СТРАТЕГИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ВАКЦИНАЦИИ. Вакцины против болезни Марека очень эффективны. Чаще всего их применение в коммерческих стаях дает уровень защиты свыше 90%. Однако можно наблюдать увеличение стай, в которых имеются чрезмерные потери от БМ. С помощью ретроспективного анализа трудно объяснить причины таких «неудач вакцинирования», хотя важную роль здесь может играть раннее воздействие ВБМ и появление новых штаммов этого вируса с повышенной вирулентностью.

Появление более вирулентных вирусных штаммов в совокупности с очевидным уменьшением эффективности вакцин в последние 20 лет вызвало оправданное беспокойство и одновременно интерес к этому вопросу. Сказанное дает основание предполагать, что вакцинация сама по себе не обеспечивает полное искоренение БМ и наверняка окончательно не решает пролему болезни Марека.

Для успешной реализации программ вакцинации очень важно точно соблюдать процедуры биологической безопасности для снижения вероятности раннего заражения. Кроме того, существенным моментом является наличие генетической резистентности (см. следующие разделы).

Генетическая резистентность. Генетически контролируемые различия в восприимчивости к БМ среди разных линий кур описаны в работе Калнека. С помощью селекции были отобраны линии кур с генетической резистентностью, которые затем поддерживались экспериментально. Резистентность к болезни Марека, по-видимому, не зависит от генетических факторов, которые определяют особенности воспроизводства.

МЕТОДЫ СЕЛЕКЦИИ. Программы селекции по резистентности исторически базировались на исследованиях потомства или воспроизводстве от выживших после перенесенного заболевания особей племенных стай.

Отбор, основанный на определении группы крови, предполагал тесную взаимосвязь между устойчивостью против БМ и аллелями области B-F главного комплекса гистосовместимости (ГКГ), особенно В 21, так как другие В-аллели связаны с восприимчивостью или с резистентностью, но в меньшей степени. Такой способ отбора может упростить выращивание устойчивых птиц в популяциях, содержащих специфичный аллель, отвечающий за резистентность. Но при этом необходимо проверять возможность негативной взаимосвязи с признаками продуктивности. Спенсер и коллеги установили, что генетически резистентные куры при вакцинации оказались защищены в большей степени, чем более восприимчивые особи. Именно поэтому при реализации программы борьбы с болезнью Марека получение генетической резистентности рассматривается как ценное дополнение иммунизации. Кроме того, генетическая резистентность может уменьшить потребность в бивалентной вакцине и вакцине на основе серотипа 1, используемых в настоящее время для борьбы против заражения сильно вирулентными штаммами. Однако резистентность как вакцинированных, так и невакцинированных кур может иногда изменяться . Это позволяет говорить о необходимости селекции в вакцинированных стаях.

Биологическая безопасность. Основным методом борьбы с болезнью Марека является изолирование пораженных особей и санитарная обработка окружающей среды. Этот метод приносит успех и широко применяется для тех стай, в которых отсутствует специфичный патогенный микроорганизм. К тому же в большинстве случаев используется фильтрованный воздух и помещения с искусственно повышенным давлением. Для снижения риска раннего воздействия ВБМ применяются методы строгой биологической безопасности, которые непрактичны при использовании в качестве основных приемов. Они являются важным и экономически эффективным дополнением к вакцинации. К сожалению, современные приемы содержания и разведения домашней птицы допускают совместное размещение особей различных возрастов рядом друг с другом и повторное использование подстилки от предыдущих бройлерных стай. Невозможность предотвращения раннего заражения, возможно, является одной из самых важных причин неудач вакцинации. При предотвращении потерь от БМ в вакцинированных стаях ключевую роль играет гигиена. Кроме того, усилия, приложенные в этом направлении, являются экономически эффективными.